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Identificación de proteínas reguladoras de la expresión génica en tripanosomátidos
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Ruiz, Elizabeth

; Ramírez, Cesar A.

; Nocua, Paola

; Requena, José María

; Puerta, Concepción J.

Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales

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Dez 2018, Volume 42 Nº 165 Páginas 306 - 318

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Resumen Los tripanosomátidos son parásitos causantes de patologías de reconocido impacto en salud pública como la enfermedad de Chagas, la enfermedad del sueño y la leishmaniasis. Estos microorganismos divergieron tempranamente de la línea evolutiva de los eucariotas y se caracterizan por poseer mecanismos peculiares de regulación génica finamente orquestados, tan eficaces que han asegurado su transmisión al permitirles adaptarse a ambientes inhóspitos y dispares como los de sus huéspedes invertebrados y mamíferos. Como consecuencia de su peculiar organización genómica, los tripanosomátidos han apostado por regular la expresión de sus genes a través de mecanismos posteriores a la transcripción, mediados principalmente por la acción de proteínas de unión a ARN (RNA-binding proteins, RBP), que reconocen su mensajero blanco gracias a la presencia de elementos reguladores en cis y se asocian con el ARN formando complejos ribonucleoprotéicos. De esta manera, las células establecen redes reguladoras en las que una misma RBP puede actuar sobre centenares de ARN mensajeros y el destino de cada uno de estos es dictado por la combinación de RBP con las que interactúa. Si bien mediante herramientas de bioinformática se han predicho cerca de un centenar de proteínas con capacidad de unión al ARN en tripanosomátidos, son pocas las que se han caracterizado y, sin duda, son muchas las que están aún por descubrir. En este artículo, se presentan las estrategias seguidas para la identificación y caracterización de proteínas reguladoras de la expresión génica en tripanosomátidos durante la última década en nuestro grupo de investigación, especialmente de las proteínas RBP directamente implicadas en la regulación posterior a la transcripción de los genes HSP70 de Leishmania braziliensis.

Abstract Trypanosomatids are parasites that cause pathologies with renowned impact on public health such as Chagas disease, the sleeping sickness, and leishmaniasis. These eukaryotes are characterized by having diverged early from their evolutionary path developing regulatory mechanisms that are efficient and finely orchestrated. Mechanisms which have ensured their transmission by allowing their adaptation to inhospitable and disparate environments such as those encountered in their invertebrate and mammal hosts. As a consequence of their peculiar genome organization, trypanosomatids have opted for regulating their gene expression mainly through post-transcriptional mechanisms, which are mediated through the action of RNA-binding proteins (RBP). These proteins recognize trypanosomatids target messengers due to the presence of cis elements and they link to the corresponding RNA forming ribonucleoprotein complexes. Thus, cells establish regulatory networks where a single RBP can act over hundreds of RNA messengers, and the destiny of any given RNA is dictated by the combination of the RBP with which it interacts. Around 100 RNA-binding proteins have been predicted by bioinformatics tools in trypanosomatids, but few of them have been characterized and there is no doubt that many are to be discovered still. In this article, we present the strategies used for the identification and characterization of gene-expression regulatory proteins in trypanosomatids over the past decade in our research group, particularly of RBPs directly implicated in the post-transcriptional regulation of the HSP70 genes of Leishmania braziliensis.

https://doi.org/10.18257/raccefyn.671 3102 downloads

Characterization of the mRNA untranslated regions [UTR] of the Trypanosoma cruzi LYT1 isoforms derived by alternative trans-splicing
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Ruíz, Elizabeth

; Augusto-Ramírez, César

; Casas, Julián Camilo

; Ospina, María Isabel

; Requena, José María

; Puerta, Concepción J.

; Salcedo-Reyes, Juan Carlos

Universitas Scientiarum

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Ago 2018, Volume 23 Nº 2 Páginas 267 - 290

Resumo: Es En Pt | Texto: Es En Pt | PDF: Es | PDF: En | PDF: Pt

Resumen En los trypanosomátidos, la expresión génica se regula principalmente en el nivel post-transcripcional mediante mecanismos basados en la interacción entre las proteínas de unión del ARN [RBP] y las figuras presentes en las regiones no traducidas [UTR] de las ARN, que en conjunto forman complejos ribonucleoproteicos [RNP] que definen el destino de la ARN. El pre-ARN derivado del gen LYT1 del Trypanosoma cruzi es procesado por trans-empalme alternativo, dando como resultado diferentes ARN que codifican las isoformas mLYTl y kLYTl, proteínas con expresión diferencial, localización celular y función. El objetivo de este estudio fue caracterizar los 5' y 3' UTR de las ARN LYT1 como el paso inicial hacia la identificación de los RPB responsables de la expresión diferencial. Se confirmó la presencia de los dos tipos de 5' UTR en dos aislantes del T. cruzi pertenecientes al DTU I; de esta forma también se comprobó la ocurrencia del trans-empalme alternativo en el gen LYT1 de este T. cruzi DTU. Además, por primera vez, se pudo demostrar la existencia de dos tipos de transcripciones de ARN LYT1, que difieren en longitud por 116 nts, y son generadas por poliadenilación alternativa. Adicionalmente, se realizó un análisis in-silico de la UTR obtenida experimentalmente, y otras diez secuencias LYT1 recuperadas de las bases de datos TritrypDB y GenBank, junto con una búsqueda exhaustiva de figuras estructuradas, mostrando una notable conservación de los figuras estructurales asociadas con el metabolismo del ARN en los diferentes UTR; estos elementos podrían estar implicados en la expresión diferenciada de la etapa específica de cada isoforma LYT1.

Abstract In trypanosomatids, gene expression is mainly regulated at posttranscriptional level, through mechanisms based on the interaction between RNA Binding Proteins [RBPs] and motifs present in the untranslated regions [UTRs] of the mRNAs, which altogether form ribonucleoproteic complexes [RNP] that define the fate of the mRNA. The pre-mRNA derived from the LYT1 gene of Trypanosoma cruzi, is processed by alternative trans-splicing, resulting in different mRNAs which code for the isoforms mLYTl and kLYTl, proteins having differential expression, cellular location and function. The aim of this study was to characterize the 5’ and 3’ UTRs of the LYT1 mRNAs as the initial step towards the objective of identification of the RBPs responsible for their differential expression. The presence of the two types of 5’ UTRs were confirmed in two T. cruzi isolates belonging to the DTU I, thus, corroborating the occurrence of alternative trans-splicing also in the LYT1 gene of this T. cruzi DTU. In addition, for the first time, was unscovered the existence of two types of LYT1 mRNAs transcripts, differing in length by 116 nts, that are generated by alternative polyadenylation. Furthermore, an in-silico analysis of the experimentally obtained UTRs, and ten additional LYT1 sequences retrieved from TritrypDB and GenBank databases, together with a thoroughly search of structural motifs, showed a remarkable conservation of relevant structural motifs previously associated with RNA metabolism in the different UTRs; these elements might be involved in the differential stage-specific expression of each LYT1 isoform.

Resumo Nos tripanossomatídeos, a expressão génica é regulada principalmente a nível pós-transcricional mediante mecanismos baseados na interação entre as proteínas de união do RNA [RBPs] e as fugiras presentes nas regiões não-traduzidas [UTRs] do RNA. O pré-RNA derivado do gene LYT1 do Trypanosoma cruzí é processado por uma junção trans-alternativa, resultando em diferentes RNA que codificam as isoformas mLYTl e kLYTl, proteínas com expressão, localização celular e função diferenciadas. O objetivo de este estudo foi caracterizar as 5’ e 3’ UTRs dos RNAs LYT1 como sendo o passo inicial na identificação das RBPs responsáveis pela expressão diferenciada. A presença dos dois tipos de 5’ UTRs foi confirmada em dois isolados de T. cruzí pertencentes ao DTU I; corroborando assim com a ocorrência da junção trans-alternativa no gene LYT1 de este T. crují DTU. Adicionalmente, se demonstrou pela primeira vez a existência de dois tipos de transcrições de RNA LYT1, que se diferenciam em comprimento por 116 nts, e são geradas por poliadenização alternativa. Além disso, realizou-se uma análise in-sílico da UTR obtida experimentalmente e outras dez sequencias LYT1 recuperadas das bases de dados TritrypDB e GenBank, junto com uma busca exaustiva de figuras estruturadas, mostrando uma notável conservação das figuras estruturais associadas com o metabolismo do RNA nas diferentes UTRs. Estes elementos poderiam estar envolvidos na expressão estágio-específica diferenciada de cada isoforma LYT1.

https://doi.org/10.11144/javeriana.sc23-2.cotm 1033 downloads

First Colombian consensus on congenital Chagas and clinical approach for women of child-bearing age diagnosed with Chagas
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Cucunubá, Zulma M.

; Valencia-Hernández, Carlos A.

; Puerta, Concepción J.

; Sosa-Estani, Sergio

; Torrico, Faustino

; Cortés, Jorge Alberto

; Ramirez, Juan David

; Vera, Mauricio J.

; Acosta, Belkis Xiomara

; Álvarez, Carlos Arturo

; Muller, Edith Ángel

; Beltrán, Mauricio

; Bermúdez, María Isabel

; Berrío, Maritza

; Camacho Moreno, Germán

; Castellanos, Yeny Zulay

; Criollo, Ingrid

; Flórez, Astrid Carolina

; Guerra Morales, Patricia

; Herazo, Rafael Antonio

; Hernández, Diana Carolina

; León, Cielo Maritza

; Medina Camargo, Manuel

; MedinaAlfonso, Mabel

; Pachón, Edwin

; Paez Fonseca, Bernardo

; Parra, María Luisa

; Pavia, Paula X.

; Quiróz, Franklin Roberto

; Ríos, Lyda Constanza

; Roa, Nubia Lucía

; Torres, Fernando

; Uribe Rivero, Luz Marina

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Dez 2017, Volume 21 Nº 4 Páginas 255 - 266

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Resumen La transmisión congénita de la enfermedad de Chagas ha sido poco estudiada en Colombia y existen pocos procedimientos rutinarios en el sistema de salud para el manejo de esta enfermedad. Por ello se desarrolló un consenso de expertos dirigido a generar recomendaciones de diagnóstico y tratamiento de Chagas con- génito y orientación a mujeres en edad fértil. Con ese propósito se realizó una búsqueda extensiva de la literatura, empleando una combinación de términos Mes (Chagas, Chagas congénito, prevención, control, diagnóstico, tratamiento y embarazo) para reflejar el estado del arte en cada tema de interés. Después de ello, se leyeron los resúmenes y aquellos seleccionados para análisis del texto completo. La literatura relevante se sintetizo, clasifico y organizo en tablas y se presentó al panel de expertos, el cual estaba constituido por 30 profesionales en diferentes áreas. Mediante la metodología Delphi se realizaron 2 rondas de cuestionarios virtuales y una reunión presencial en los cuales se evaluaron los niveles de acuerdo entre los participantes. Los puntos con falta de consenso durante las 2 rondas virtuales se expusieron durante las mesas de discusión en la ronda presencial. La evidencia utilizada se adaptó a las particularidades nacionales según el caso y se aprobó el contenido del documento final. Se propone que estas recomendaciones sean usadas por profesionales de la salud en Colombia.

Abstract Congenital transmission of Chagas disease has not been extensively studied in Colombia, and there are no standardized processes in the health system regarding the specific diagnosis, treatment and follow-up of this disease. To generate recommendations on congenital Chagas disease and Chagas in women of childbearing age in Colombia, a consensus of experts was developed. An extensive literature search through the Medline database was carried out using the MeSH terms: «Chagas disease/congenital», «prevention and control», «diagnosis», «therapeutics» and «pregnancy». Appropriate abstracts were selected and the full texts were analyzed. The relevant information was synthesized, classified, and organized into tables and figures and was presented to a panel of experts, which was composed of 30 professionals from various fields. Based on the Delphi methodology, three rounds of consultation were conducted. The first and second rounds were based on electronic questionnaires that measured the level of consensus of each question among the participants. The third round was based on a face-to-face discussion focusing on those questions without consensus in the previous consultations. The evidence was adapted to national circumstances on a case-by-case basis, and the content the final document was approved. These recommendations are proposed for use in routine medical practice by health professionals in Colombia.

https://doi.org/10.22354/in.v21i4.689 799 downloads

La respuesta inmunitaria adaptativa en la infección crónica por Trypanosoma cruzi
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González, John M.

; Cuéllar, Adriana

; Puerta, Concepción J.

Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales

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Dez 2017, Volume 41 Nº 161 Páginas 456 - 465

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Resumen La infección por Trypanosoma cruzi causa la enfermedad de Chagas, la cual presenta una fase aguda en la que la activación del sistema inmunitario ayuda a controlar el parásito. No obstante, el parásito puede persistir en bajos niveles y producir una fase crónica en la cual el 70 % de los individuos infectados permanece asintomático, en tanto que los demás presentan compromiso tisular, principalmente en el corazón, y pueden desarrollar una miocardiopatía inflamatoria crónica. Durante el proceso de infección la respuesta inmunitaria tiene un papel importante en la protección, pero también se ha asociado con la patogenia, especialmente en la fase crónica. Los estudios del grupo de investigación sobre la enfermedad de Chagas conformado por investigadores de la Universidad de los Andes y la Pontificia Universidad Javeriana en Colombia, se han centrado en analizar la respuesta inmunitaria adaptativa inducida frente a T. cruzi. En este artículo, se resumen y analizan los resultados de la evaluación de la respuesta inmunitaria humoral contra la proteína KMP-11 del parásito, así como de la respuesta inmunitaria celular en sangre periférica de pacientes con cardiopatía chagásica crónica. La funcionalidad de los anticuerpos específicos y el porcentaje de linfocitos T específicos de antígeno en sangre periférica y sus marcadores de funcionalidad se evaluaron usando un péptido de nueve aminoácidos de la proteína KMP-11 denominado TcTLE.

Abstract Trypanosoma cruzi infection causes Chagas disease, which presents an acute phase where the activation of the immune system can help to control the parasite. However, the parasite persists at a low level leading to a chronic phase where 70% of the infected individuals remain asymptomatic, and the others have tissue involvement, mainly a chronic inflammatory cardiomyopathy. During the infection process, the immune response plays an important role in protection, but it has also been associated with pathogenesis, especially during the chronic phase. The studies carried out by the Chagas disease research group from Universidad de los Andes and the Pontificia Universidad Javeriana in Colombia, have been focused on dissecting the adaptive immune response induced against T. cruzi. Here we summarize and analyze the results of the evaluation of the humoral immune response against the KMP-11 protein from the parasite. We also describe the cellular immune response against T. cruzi in peripheral blood of patients with chronic Chagas heart disease. We evaluated the possible role of peptide-specific antibodies and the percentage of peripheral blood antigen-specific lymphocytes and their surface markers using a nine amino acids peptide from the KMP-11 protein termed TcTLE.

https://doi.org/10.18257/raccefyn.506 4628 downloads

Primer consenso colombiano sobre Chagas congénito y orientación clínica a mujeres en edad fértil con diagnóstico de Chagas
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Cucunubá, Zulma M.

; Valencia-Hernández, Carlos A.

; Puerta, Concepción J.

; Sosa-Estani, Sergio

; Torrico, Faustino

; Cortés, Jorge Alberto

; Ramirez, Juan David

; Vera, Mauricio J.

; Acosta, Belkis Xiomara

; Álvarez, Carlos Arturo

; Muller, Edith Ángel

; Beltrán, Mauricio

; Bermúdez, María Isabel

; Berrío, Maritza

; Camacho Moreno, Germán

; Castellanos, Yeny Zulay

; Criollo, Ingrid

; Flórez, Astrid Carolina

; Guerra Morales, Patricia

; Herazo, Rafael Antonio

; Hernández, Diana Carolina

; León, Cielo Maritza

; Medina Camargo, Manuel

; Medina Alfonso, Mabel

; Pachón, Edwin

; Paez Fonseca, Bernardo

; Parra, María Luisa

; Pavia, Paula X.

; Quiróz, Franklin Roberto

; Ríos, Lyda Constanza

; Roa, Nubia Lucía

; Torres, Fernando

; Uribe Rivero, Luz Marina

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Jun 2014, Volume 18 Nº 2 Páginas 50 - 65

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

La transmisión congénita de la enfermedad de Chagas ha sido poco estudiada en Colombia y existen pocos procedimientos rutinarios en el sistema de salud para el manejo de esta enfermedad. Por ello se desarrolló un consenso de expertos dirigido a generar recomendaciones de diagnóstico y tratamiento de Chagas congénito y orientación a mujeres en edad fértil. Con ese propósito se realizó una búsqueda extensiva de la literatura, empleando una combinación de términos MeSH (Chagas, Chagas congénito, prevención, control, diagnóstico, tratamiento y embarazo) para reflejar el estado del arte en cada tema de interés. Después de ello, se leyeron los resúmenes y aquellos seleccionados para análisis del texto completo. La literatura relevante se sintetizó, clasificó y organizó en tablas y se presentó al panel de expertos, el cual estaba constituido por 30 profesionales en diferentes áreas. Mediante la metodología Delphi se realizaron 2 rondas de cuestionarios virtuales y una reunión presencial en los cuales se evaluaron los niveles de acuerdo entre los participantes. Los puntos con falta de consenso durante las 2 rondas virtuales se expusieron durante las mesas de discusión en la ronda presencial. La evidencia utilizada se adaptó a las particularidades nacionales según el caso y se aprobó el contenido del documento final. Se propone que estas recomendaciones sean usadas por profesionales de la salud en Colombia.

Congenital transmission of Chagas disease has not been extensively studied in Colombia, and there are no standardized processes in the health system regarding the specific diagnosis, treatment and follow-up of this disease. In order to generate recommendations on congenital Chagas disease and Chagas in women of childbearing age in Colombia, a consensus of experts was developed. An extensive literature search through the Medline database was carried out using the MeSH terms: " Chagas disease/congenital " , " prevention and control " , " diagnosis " , " therapeutics " and " pregnancy " . Appropriate abstracts were selected and the full texts were analyzed. The relevant information was synthesized, classified, and organized into tables and figures and was presented to a panel of experts, which was composed of 30 professionals from various fields. Based on the Delphi methodology, three rounds of consultation were conducted. The first and second rounds were based on electronic questionnaires that measured the level of consensus of each question among the participants. The third round was based on a face-toface discussion focusing on those questions without consensus in the previous consultations. The evidence was adapted to national circumstances on a case-by-case basis, and the content the final document was approved. These recommendations are proposed for use in routine medical practice by health professionals in Colombia.

https://doi.org/10.1016/j.infect.2013.12.001 2694 downloads

Evaluación preliminar de la prueba comercial Chagas ( Trypanosoma cruzi ) IgG-ELISA ® en individuos colombianos
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Llano, Mónica

; Pavía, Paula

; Flórez, Astrid Carolina

; Cuéllar, Adriana

; González, John M.

; Puerta, Concepción

Biomédica

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Jun 2014, Volume 34 Nº 2 Páginas 228 - 236

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Introducción. El diagnóstico de la enfermedad de Chagas es fundamental para brindar un tratamiento oportuno y mejorar el pronóstico del paciente. La capacidad discriminatoria de las pruebas serológicas para el diagnóstico varía de acuerdo con la prevalencia de la enfermedad y el antígeno utilizado en la prueba. Objetivo. Evaluar la capacidad discriminatoria de la prueba comercial Chagas ( Trypanosoma cruzi ) IgG-ELISA ® (NovaTec Immunodiagnostica GmbH) en un grupo de individuos colombianos utilizando la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y el ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) como referencia. Materiales y métodos. Se incluyeron 78 muestras de pacientes crónicos (36 asintomáticos y 42 sintomáticos) y 21 de controles sanos. También se analizaron 17 individuos no infectados con riesgo epidemiológico para la enfermedad de Chagas, siete con leishmaniasis y nueve con enfermedad cardiaca. Se evaluaron por PCR en tiempo real cuatro individuos cuyos resultados variaron entre pruebas. Resultados. Se encontraron diferencias significativas a una densidad óptica de 450 nm (p<0,0001) al comparar la mediana de la absorbancia entre los controles sanos (0,143) y los asintomáticos (2,401) o sintomáticos (2,776), entre los asintomáticos y sintomáticos (p=0,0408), entre los seronegativos con riesgo (0,232), individuos con enfermedades cardiacas (0,367) o con leishmaniasis (0,337) y los pacientes con enfermedad de Chagas (p<0,0001), y entre los controles sanos y los pacientes seronegativos con riesgo (p=0,0264), con enfermedades cardiacas (p=0,0015) o con leishmaniasis (p=0,002). La PCR en tiempo real fue positiva en tres de los cuatro casos. Conclusiones. Esta prueba comercial de ELISA permitió discriminar a los pacientes con Chagas de los controles. Se requieren estudios de fase II para determinar las características operativas de la prueba.

Introduction: The diagnosis of Chagas´ disease is essential to provide early treatment and improve patients´ prognosis . The discriminatory efficiency of the serological tests varies according to the disease prevalence and the test- antigen used . Objective: To evaluate the discriminatory efficiency of the commercial kit Chagas ( Trypanosoma cruzi ) IgG-ELISA ® (Nova Tec Immunodiagnostica GmbBH) in a group of Colombian individuals, using indirect immunofluorescence antibody testing (IFAT) and enzyme immunoassay (ELISA) tests as references. Materials and methods: Seventy-eight samples from chronic chagasic patients (36 asymptomatic and 42 symptomatic) and 21 healthy controls were included. Seventeen samples from non-infected people with Chagas´ disease epidemiological risk, seven with leishmaniasis and nine with non-chagasic cardiomyopathy were also analyzed. Real time PCR was performed on four individuals whose results differed among tests. Results: Significant differences at 450 nm optical absorbance were found (p<0.0001) when the median absorbance values of healthy controls (0.143), asymptomatic (2.401) and symptomatic (2.776) chagasic patients were compared, as well as when asymptomatic and symptomatic patients (p=0.0408) and seronegative people with epidemiological risk (0.232), cardiomyopathy (0.367) or leishmaniasis (0.337) were compared with chagasic patients (p<0.0001). Finally, there were differences among healthy controls and non-infected people with epidemiological risk (p=0.0264), patients with non-chagasic cardiomyopathy (p=0.0015) and patients with leishmaniasis (p=0.002). Real-time PCR was positive in three out of four analyzed cases. Conclusions: The commercial ELISA test allowed us to discriminate the chagasic patients from the controls. A phase II study of diagnostic tests for determining field reliability of this test is required.

https://doi.org/10.7705/biomedica.v34i2.1580 3213 downloads

Diseño de un panel multicolor para evaluar moléculas intracelulares y de superficie mediante citometría de flujo
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Mateus, Jose

; Lasso, Paola

; González, John Mario

; Puerta, Concepción Judith

; Cuéllar, Adriana

Biomédica

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Dez 2013, Volume 33 Nº 4 Páginas 660 - 672

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Introducción. La citometría de flujo permite detectar la presencia de moléculas intracelulares y de superficie, de forma simultánea sobre cada célula. Objetivo. Describir un método para la construcción armónica de un panel multicolor con 11 parámetros para el análisis fenotípico y funcional de linfocitos T (LT) CD8 + por citometría de flujo. Materiales y métodos. Para la construcción del panel multicolor, se seleccionaron las moléculas y se titularon los conjugados con fluorocromos para la determinación de CD3, CD8, CCR7, CD28, CD27, CD45RA, CD95 y CD127, en células mononucleares de sangre periférica. Para la evaluación del panel, se hizo la construcción progresiva adicionando uno a uno los conjugados y la fluorescencia menos uno (FMO). Este método fue aplicado para células ex vivo y para evaluar la producción de IFN ? , IL-2 y TNFa frente al estímulo con la enterotoxina B de Staphylococcus aureus (SEB) y al antígeno crudo de Trypanosoma cruzi . Finalmente, se procedió al análisis de las subpoblaciones de LT CD8 + ex vivo en individuos sanos. Resultados. La evaluación de las moléculas con los conjugados no mostró interferencia en las señales de fluorescencia. Las frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8 + evaluadas fueron cercanas a los valores reportados en otros estudios. Además, se observó que la frecuencia de LT CD8 + productores de IFN ? , IL-2 y TNFa fue mayor a las seis horas de cultivo con SEB y con el antígeno crudo de T. cruzi . Conclusiones. El método aplicado para la construcción del panel multicolor permite obtener frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8 + que corresponden a lo reportado en la literatura científica.

Introduction: Flow cytometry allows simultaneous detection of surface and intracellular molecules on each cell. Objective: To describe a method for building up a harmonic multicolor panel with 11 flow cytometry parameters for phenotypic and functional analysis on CD8 + T lymphocytes. Materials and methods: For the multicolor panel construction, we selected the molecules and titred conjugated antibodies with fluorochromes for CD3, CD8, CCR7, CD28, CD27, CD45RA, CD95 and CD127 determination in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). To evaluate the panel, the conjugated antibodies were gradually added one by one and fluorescence minus one (FMO) test was performed. This method was applied to assess ex vivo subpopulations of T cells and the production of intracellular IFN ? , IL-2 and TNF a using polyclonal stimulation with enterotoxin B from Staphylococcus aureus (SEB) and antigen-specific cells with crude Trypanosoma cruzi antigen. Finally, the ex vivo CD8 + T lymphocyte subpopulations frequencies were analyzed in healthy individuals. Results: The evaluation of the selected molecules and conjugates did not show interference in the fluorescence signals and detection. The frequencies of CD8 + T cells evaluated were similar to the values reported in other studies. Additionally, we observed that the frequency of CD8 + T lymphocytes producing IFN ? , IL-2 and TNF a was higher 6 hours after culture with SEB and crude T. cruzi lysate. Conclusions: The method used for the construction of a multicolor panel allows obtaining frequencies of CD8 + T lymphocyte subpopulations corresponding to those reported in the literature.

https://doi.org/10.7705/biomedica.v33i4.1709 4170 downloads Citado 2 vezes em SciELO

A human astrocytoma cell line is highly susceptible to infection with Trypanosoma cruzi
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Vargas-Zambrano, Juan Camilo

; Lasso, Paola

; Cuellar, Adriana

; Puerta, Concepción Judith

; González, John Mario

Memórias do Instituto Oswaldo Cruz

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Abr 2013, Volume 108 Nº 2 Páginas 212 - 219

Resumo: En | Texto: En | PDF: En

Astrocytes play a vital role in neuronal protection, homeostasis, vascular interchange and the local immune response. Some viruses and parasites can cross the blood-brain barrier and infect glia. Trypanosoma cruzi, the aetiological agent of Chagas disease, can seriously compromise the central nervous system, mainly in immune-suppressed individuals, but also during the acute phase of the infection. In this report, the infective capacity of T. cruzi in a human astrocyte tumour-derived cell line was studied. Astrocytes exposed to trypomastigotes (1:10 ratio) produced intracellular amastigotes and new trypomastigotes emerged by day 4 post-infection (p.i.). At day 6 p.i., 93% of the cells were infected. Using flow cytometry, changes were observed in both the expression of major histocompatibility complex class I and II molecules and the chemokine secretion pattern of astrocytes exposed to the parasite. Blocking the low-density lipoprotein receptor on astrocytes did not reduce parasite intracellular infection. Thus, T. cruzi can infect astrocytes and modulate the immune response during central nervous system infection.

https://doi.org/10.1590/0074-0276108022013014 3120 downloads Citado 1 vez em SciELO

Expression of inhibitory receptors on CD4+ and CD8+ T cells from healthy Colombian donors
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Abr 2012, Volume 17 Nº 1 Páginas 35 - 42

Resumo: Es En Pt | Texto: Es En Pt | PDF: Es | PDF: En | PDF: Pt

La activación de células T involucra señales positivas que promueven funciones efectoras y señales negativas que contribuyen a la regulación de la respuesta inmune. Estas actividades regulatorias son generadas por la activación de receptores de las células T e incluyen moléculas como CD160, 2B4, PD-1 y CTLA-4. Objetivo. Evaluar la expresión de los receptores inhibitorios CD160, 2B4, PD-1 y CTLA-4 en células T CD4+ y CD8+ de donantes sanos colombianos. Materiales y métodos. Se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica de 30 donantes sanos provenientes de Bogotá (Colombia) mediante gradiente de densidad por Ficoll-Hypaque, las células fueron marcadas con anticuerpos conjugados a fluorocromos previamente titulados. Resultados. CD160, 2B4, y PD-1 presentaron porcentajes de expresión en células T CD4+ de 0.35%, 1.04% y 1.35% respectivamente. En células T CD8+ estos receptores mostraron niveles de expresión más altos con porcentajes de 16.3%, 8.97% y 4.3% respectivamente. A diferencia de los otros receptores, CTLA-4 no mostró diferencias entre células T CD4+ (1.56%) y CD8+ (1.53%). Los porcentajes de co-expresión de CD160/2B4 y CTLA-4/PD-1 en células T CD4+ fueron de 0.18% y 0.09%, en células T CD8+ se observaron porcentajes de expresión de 4.02% y 0.2%. Conclusión. Este es el primer reporte que muestra la frecuencia de expresión de receptores inhibitorios tales como CD160, 2B4, PD-1 y CTLA-4 en células T CD4+ y CD8+ de donantes sanos colombianos. Estos hallazgos representan una línea de base para el análisis y la comparación de estos receptores en la población colombiana con diferentes enfermedades.

T cell activation involves positive cellular signals that promote effector functions and negative signals that contribute to the regulation of these responses. These regulatory signals are generated upon activation of receptors on T cells that include CD160, 2B4, Programmed Death-1 and CTLA-4. Objective. To evaluate the expression of inhibitory receptors like CD160, 2B4, Programmed Death-1 and CTLA-4 on CD4+ and CD8+ T cells from healthy Colombian donors. Materials and methods. Peripheral blood mononuclear cells from 30 healthy donors from Bogotá (Colombia) were obtained via Ficoll-Hypaque density gradient and cells were stained with specific conjugated antibodies previously titrated. Results. The CD160, 2B4, and Programmed Death-1 inhibitory markers were detected on CD4+ T cells with expression levels of 0.35%, 1.04%, and 1.35%, respectively. On CD8+ T cells, these markers were expressed at higher levels: 16%, 8.97%, and 4.3%, respectively. In contrast to the other receptors, CTLA-4 frequency of expression showed no significant difference between CD4+ (1.56%) and CD8+ (1.53%) T cells. Frequency of CD160/2B4 and CTLA-4/ Programmed Death-1 coexpression was 0.18% and 0.09% on CD4+ cells, and 4.02% and 0.2% on CD8+ T cells. Conclusions. This is the first report showing the frequency of inhibitory receptors such as CD160, 2B4, Programmed Death-1, and CTLA-4 on CD4+ and CD8+ T cells from healthy Colombian donors. Our findings serve as a baseline for the analysis and comparison of these receptors in Colombian populations with different disease conditions.

A ativação de células T envolve sinais positivos que promovem funções efetoras e sinais negativos que contribuem para a regulação da resposta imune. Estas atividades reguladoras são geradas através da ativação de receptores de células T e incluem moléculas tais como CD160, 2B4, PD-1 e CTLA-4. Objetivo. Avaliar a expressão de receptores inibitórios CD160 e 2B4, PD-1 e CTLA-4 em células T CD4+ e CD8+ de doadores saudáveis colombianos. Materiais e métodos. Foram obtidas células mononucleares do sangue periférico de 30 doadores saudáveis provenientes de Bogotá (Colômbia) a partir de gradiente de densidade por Ficoll-Hypaque, as células foram marcadas com anticorpos conjugados com fluorocromos previamente titulados. Resultados. CD160, 2B4, e PD-1 mostraram percentagens de expressão em células T CD4+ de 0,35%, 1,04% e 1,35%, respectivamente. Em células T CD8+ estes receptores mostraram níveis de expressão mais elevados com percentagens de 16,3%, 8,97% e 4,3% respectivamente. Ao contrário de outros receptores, CTLA-4 não apresentou diferenças entre células T CD4+ (1,56%) e CD8+ (1,53%). As percentagens de co-expressão de CD160/2B4 e CTLA-4/PD-1 em células T CD4+ foram de 0,18% e 0,09%; em células T CD8+ foram observadas percentagens de expressão de 4,02% e 0,2%. Conclusão. Este é o primeiro relatório que apresenta a frequência de expressão de receptores inibitórios tais como CD160, 2B4, PD-1 e CTLA-4 em células T CD4+ e CD8+ de doadores saudáveis colombianos. Estes resultados representam uma linha de base para análise e comparação desses receptores na população colombiana com diferentes doenças.

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10.

Seguimiento de paciente con enfermedad de Chagas y trasplante de corazón mediante las PCR S35-S36 y TcH2AF-R
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Jun 2011, Volume 31 Nº 2 Páginas 178 - 184

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Introducción. La cardiomiopatía es la forma clínica más común de la enfermedad de Chagas en Colombia, siendo el trasplante una opción para su tratamiento. Debido al riesgo de reactivación de la infección posterior al trasplante, es prioritario vigilar el comportamiento del parásito. Objetivo. Presentar el caso de un paciente con cardiopatía chagásica dilatada y falla cardiaca, a quien se le practicó trasplante de corazón y se le hizo seguimiento mediante PCR, análisis histopatológicos y ecocardiográficos. Materiales y métodos. Se tomaron muestras de sangre antes de la intervención y después de ella y de biopsias endomiocárdicas posteriores al trasplante. El ADN extraído fue amplificado con los iniciadores TcH2AF-R y S35-S36. La parasitemia se examinó mediante la técnica de microhematocrito. Se practicaron estudios histopatológicos para determinar la presencia del parásito o el rechazo del trasplante y, ecocardiográficos, para evaluar la función cardiaca. Resultados. De las muestras de sangre tomadas a los 83 y 48 días previos al trasplante, la última fue positiva por la PCR S35-S36. Hasta el segundo mes después del trasplante, ambas PCR fueron negativas. Al tercer mes después del trasplante, ambas PCR fueron positivas, por lo cual se inició tratamiento con nifurtimox. Tras 35 días de haberse iniciado el tratamiento, ambas pruebas presentaron resultados negativos, al igual que las tomadas a los 0, 3, 10 y 12 meses posteriores. Los resultados de la histopatología, del microhematocrito y de las PCR de las biopsias, fueron negativos en todas las fechas. Conclusiones. Las PCR permitieron sospechar la reactivación de la infección en el paciente, se le administró el tratamiento y posterioremente las pruebas se tornaron negativas. La evolución clínica del paciente ha sido favorable.

Introduction. Cardiomyopathy is the most common clinical form of Chagas´ disease in Colombia, and one treatment option is a heart transplant. Tracking the behavior of the Chagas´ parasite, Trypanosoma cruzi, is a priority due to the risk of post-transplant reactivation of the infection. Objective. A case is presented of a patient who had suffered from dilated chagasic cardiopathy and cardiac failure, and had subsequently undergone heart transplant. The case was monitored by PCR, histopathological and echocardiographic examinations. Materials and methods. Blood samples were drawn before and after the transplant, and post-transplant endomyocardial biopsies were taken. The extracted DNA was amplified with the TcH2AF-R and S35-S36 primers. Parasitemia was examined by the microhematocrit test. In addition, histopathological studies determined the parasite presence and transplant rejection status. Echocardiograms were administered to evaluate cardiac function. Results. Of the blood samples taken 83 and 48 days pre-transplant, the latter was positive by the S35-S36 PCR test. PCR tests in blood with both primers were negative up to the second month post-transplant. However, both PCR tests were positive by the third month post-transplant. Thereupon, the patient was treated with nifurtimox. Both tests presented negative results in blood 35 days after treatment was started and remained negative thereafter at 0, 3, 10 and 12 months post-treatment. The pathology, microhematocrit, and PCR test results from biopsies were negative on all the specified dates. Conclusions. PCR tests were used as indicators of a reactivation of trypanosomid infection in the patient. After treatment administration, PCR tests became negative. The patient´s clinical evolution was favorable.

2329 downloads

11.

Secuencia parcial del genoma del maxicírculo de Leishmania braziliensis, comparación con otros tripanosomátidos
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Jan 2011, Volume 16 Nº 1 Páginas 29 - 50

Resumo: Es En Pt | Texto: Es En Pt | PDF: Es | PDF: En | PDF: Pt

Objetivo. Con el fin de aportar nueva información relevante para estudios de genotipificación y filogenética del género Leishmania, en este estudio se determinó y comparó la secuencia del maxicírculo de Leishmania braziliensis, cepa MHOM-BR-75-M2904, con las secuencias del maxicírculo reportadas para otras especies de tripanosomátidos. Materiales y métodos. La búsqueda de las secuencias del maxicírculo se realizó en las bases de datos de secuencias no ensambladas del GeneDB versión 2.1, así como en el GenBank, utilizando los genes ND8 y RPS12 de L. braziliensis como sonda inicial. Estas secuencias se ensamblaron y se compararon con sus homólogas en otros tripanosomátidos mediante el uso de herramientas bioinformáticas como LALIGN y ClustalW2. El tamaño total del maxicírculo se determinó mediante ensayos de Southern blot. Resultados. Se ensamblaron dos fragmentos del maxicírculo de L. braziliensis de 6535 y 4257 nucleótidos, cuyos genes presentaron elevada sintenia y similitud en sus secuencias con los previamente reportados en otras especies de Leishmania. Similitud que se extiende incluso a los patrones de edición de estas moléculas. Conclusiones. A pesar de ser L. braziliensis la especie más divergente del género Leishmania en cuanto a su genoma nuclear, el marxicírculo presenta una elevada conservación. Resultado que sugiere que el patrón de edición presente en las diferentes especies de Leishmania hasta ahora estudiadas se conserva también en el subgénero Viannia, lo que indica una elevada conservación en la edición de los transcritos mitocondriales a nivel de género.

Objective. With the aim to provide new insights for genotyping and phylogenetic studies of the Leishmania genus, in this study the sequence of the maxicircle in Leishmania braziliensis, strain MHOM-BR-75-M2904, was determined and compared with those reported in other trypanosomatids species. Materials and methods. Searches for maxicircle sequences were performed in the unassembled sequences of GeneDB database version 2.1, as well as in the GenBank, using the ND8 and RPS12 genes of L. braziliensis as the initial probes. These sequences were assembled and compared with the homologous sequences of trypanosomatids using the bioinformatics tools LALIGN and ClustalW2. The size of maxicircle was determined by Southern blot assays. Results. Two maxicircle fragments of 6535 and 4257 nucleotides were assembled. The sequences of these genes showed high synteny and similarity with the sequences in other Leishmania species. This similarity even was extended to the editing patterns of these molecules. Conclusions. Although L. braziliensis is the most divergent species of the Leishmania genus in their nuclear genome, the maxicicircle has a high conservation. This result suggests that the pattern of editing present in the different Leishmania species studied has been conserved also in the subgenus Viannia. These results indicate a high conservation in the editing of mitochondrial transcripts at the genus level.

Objetivo. Com o fim de contribuir nova informação relevante para estudos de genotipagem e filogenética do género Leishmania, neste estudo determinou-se a sequência do maxicirculo de Leishmania braziliensis, cepa MHOM-BR-75-M2904, comparandosecom as seqüências do maxicirculo reportadas para outras espécies de tripanossomatídeos. Materiais e Métodos. A busca das seqüências do maxicirculo foi realizada nas bases de dados para seqüências não alinhadas no GeneDB versão 2.1, assim como no GeneBank, utilizando o genes ND8 e RPS12 de L. braziliensis como sonda inicial. Essas seqüências foram alinhadas e comparadas com as suas homologas em outros tripanossomatídeos, mediante o uso de ferramentas bioinformáticas como L-ALIGN e ClustalW2. O tamanho total do maxicirculo foi determinado mediante ensaios de Southern blot. Resultados. Foram alinhados dois fragmentos do maxicirculo de L. braziliensis de 6535 e 4257 nucleotídeos, cujos genes apresentaram elevada sintenia e similaridade nas suas seqüências com os genes previamente reportados nas outras espécies de Leishmania. A similaridade vista estende-se, inclusive, aos padrões de edição para estas moléculas. Conclusões. Apesar de L. braziliensis ser a espécie mais divergente do gênero Leishmania, no que se refere ao seu genoma nuclear, o maxicirculo apresenta uma alta conservação. Esse resultado sugere que o padrão de edição apresentado nas espécies de Leishmania até agora estudadas, é conservado também no subgênero Viannia, o que indica uma alta conservação na edição dos transcritos mitocôndriais ao nível de gênero.

1842 downloads

12.

Reporte del primer caso de enfermedad de Chagas transplacentaria analizado por AP-PCR en Moniquirá, Boyacá
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Dez 2009, Volume 29 Nº 4 Páginas 513 - 522

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Introducción. La principal vía de transmisión de la enfermedad de Chagas es por medio de los insectos vectores de la familia Reduviidae. Sin embargo, el parásito también puede ser transmitido de madres infectadas al feto in utero. Hasta la fecha no existen informes de casos de Chagas transplacentario en Colombia. Objetivo. Presentar un caso de transmisión transplacentaria ocurrido en Moniquirá, Boyacá, Colombia, y confirmarlo con el análisis de las cepas aisladas de la madre y de su bebé mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores arbitrarios. Materiales y métodos. De los hemocultivos positivos de una madre chagásica y su hijo, se extrajo el ADN de los tripanosomas y se caracterizá la especie y grupo por PCR. El genotipo de las cepas se determinó mediante AP-PCR con los iniciadores basados en los genes de b-globina (5'™-CCTCACCTTCTTTCATGGAG-3'™) y del ARNr 16S (5'™-ACGGGCAGTGTGTACAAGACC-3'™), en reacciones diferentes. Resultados. Las cepas de Trypanosoma cruzi aisladas de los hemocultivos de la madre y de su hijo mostraron el mismo perfil de amplificación por ambas pruebas de AP-PCR, concordante con el observado en las cepas T. cruzi I utilizadas como control. En los hemocultivos procedentes del reción nacido se encontrá también T. cruzi II. Conclusiones. Éste es el primer caso de enfermedad de Chagas transplacentaria reportado en el municipio de Moniquirá, que demuestra que esta forma de transmisión ocurre en el país. La presencia de infección mixta por ambos grupos de T. cruzi en las muestras del recién nacido, sugiere infección mixta en la madre, con mayor prevalencia de T. cruzi I, al menos en el hemocultivo.

Introduction. The main route of Chagas disease transmission is through vectors of the insect family Reduviidae. However, the parasite can also be transmitted from infected mothers to their fetus in utero. Until now, no cases of congenital Chagas disease have been reported in Colombia. Objective. A congenital Chagas disease case occurred in Moniquirá County, Boyacá, Colombia. It was confirmed by comparing strains isolated from the mother and her baby using polymerase chain reaction (PCR) with arbitrary primers. Materials and methods. The parasite DNA was extracted from positive blood cultures of the aflicted mother and her son. The species confirmation and group detection were performed by PCR. The strain genotypes were determined by AP-PCR with two oligonucleotides based on the genes for the b-globin (5'™-CCTCACCTTCTTTCATGGAG-3'™) and 16S RrNA (5'™-ACGGGCAGTGTGTACAAGACC-3'™), in differente reactions. Results. The T. cruzi strains isolated from the blood cultures of the mother and her son showed the same amplification profile by the two AP-PCR tests; this corresponded with profiles of the T. cruzi I strains used as controls. However, T. cruzi II was also found in the blood culture from the newborn. Conclusions. This is the first case of Chagas disease transmission reported in Moniquirá, demonstrating that this form of transmission occurs in Colombia. The presence of both groups of T. cruzi in the newborn sample suggests mixed infection in the mother as well, with a higher prevalence of T. cruzi I, at least in the mother's blood culture.

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13.

Células dendríticas y linfocitos T reguladores naturales en pacientes con enfermedad crónica de Chagas
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Dez 2009, Volume 13 Nº 4 Páginas 246 - 253

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

Dada la cronicidad y persistencia del parásito Trypanosoma cruzi en la enfermedad de Chagas, el control homeostático de la respuesta inmunitaria para prevenir el daño tisular y limitar la duración del proceso inflamatorio involucra células con potencial regulador como las células dendríticas y los linfocitos T reguladores. Es por tal motivo que el objetivo de este estudio fue evaluar la proporción de células dendríticas totales, subpoblaciones de células dendríticas mieloides y plasmacitoides y los linfocitos T reguladores naturales en pacientes con enfermedad de Chagas y controles sanos. Las células mononucleares de sangre periférica de 18 pacientes con enfermedad crónica de Chagas y 16 controles sanos se sometieron a marcación para células dendríticas mieloides Lin- HLA-DR+ CD11c+, CD plasmacitoides Lin- HLA-DR+ CD123+ y linfocitos T reguladores naturales CD3+ CD4+ CD25+ Foxp3+ CD127bajo. Las proporciones celulares se calcularon mediante el porcentaje obtenido por citometría de flujo. Se encontró que la proporción de células dendríticas plasmacitoides es menor que la de las mieloides, tanto en pacientes con enfermedad crónica de Chagas como en controles sanos, sin diferencias significativas entre ambos grupos. En contraste, se encontró una proporción significativamente mayor de linfocitos T reguladores naturales en los pacientes con enfermedad de Chagas al comparar con los controles sanos. En conclusión, la mayor proporción de linfocitos T reguladores naturales en pacientes con enfermedad crónica de Chagas sugiere que estas células pueden estar contribuyendo en la patogénesis de la enfermedad.

Given the chronicity and persistence of the parasite Trypanosoma cruzi in the Chagas disease victims, the homeostatic control of immune response to prevent tissue damage and limit the duration of the inflammatory process involves cells with regulatory potential as dendritic cells (DC) and regulatory T cells. For this reason, the objective of this study is to evaluate the proportion of total DC, myeloid and plasmacytoid DC subpopulations and natural regulatory T cells in chronic chagasic patients and healthy control subjects. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 18 chronic chagasic patients and 16 healthy control subjects were staining to myeloid DC Lin- HLA-DR+ CD11c+, plasmacytoid DC Lin-, HLA-DR+, CD123+ and natural regulatory T lymphocytes CD3+ CD4+ CD25+ Foxp3+ CD127low. Cellular proportions were calculated using the percentage obtained by flow cytometry. It was found that plasmacytoid CD proportion was lower than myeloid CD in both, chronic chagasic patients and healthy control subjects, without significant differences between the two groups. On the contrary, it was found that the proportion of natural regulatory T cells was significantly higher in chronic chagasic patients than in healthy control subjects upon comparing the two. These results suggest that the higher proportion of natural regulatory T cells in chronic chagasic patients might contribute to the disease pathogenesis.

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14.

Cl gene cluster encoding several small nucleolar RNAs: a comparison amongst trypanosomatids
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Memórias do Instituto Oswaldo Cruz

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Mai 2009, Volume 104 Nº 3 Páginas 473 - 480

Resumo: En | Texto: En | PDF: En

Small nucleolar RNAs (snoRNAs) are small non-coding RNAs that modify RNA molecules such as rRNA and snRNA by guiding 2'-O-ribose methylation (C/D box snoRNA family) and pseudouridylation reactions (H/ACA snoRNA family). H/ACA snoRNAs are also involved in trans-splicing in trypanosomatids. The aims of this work were to characterise the Cl gene cluster that encodes several snoRNAs in Trypanosoma rangeli and compare it with clusters from Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei, Leishmania major, Leishmania infantum, Leishmania braziliensis and Leptomonas collosoma. The T. rangeli Cl gene cluster is an 801 base pair (bp) repeat sequence that encodes three C/D (Cl1, Cl2 and Cl4) and three H/ACA (Cl3, Cl5 and Cl6) snoRNAs. In contrast to T. brucei, the Cl3 and Cl5 homologues have not been annotated in the Leishmania or T. cruzi genome projects (http//:www.genedb.org). Of note, snoRNA transcribed regions have a high degree of sequence identity among all species and share gene synteny. Collectively, these findings suggest that the Cl cluster could constitute an interesting target for therapeutic (gene silencing) or diagnostic intervention strategies (PCR-derived tools).

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15.

Caracterización molecular de los genes histona H2A y ARNsno-Cl de Trypanosoma rangeli: aplicación en pruebas diagnósticas
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; Gil, Juliana

; Romero, Ibeth

; Morales, Liliana

; Díez, Hugo

; Quintero, Claudia

; del Portillo, Patricia

; Vallejo, Gustavo Adolfo

; Florez, Astrid C

; Montilla, Marleny

; Mercado, Marcela

; Vacca, Miguel

; Nicholls, Rubén Santiago

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Mar 2009, Volume 13 Nº 1 Páginas 43 - 57

Resumo: Es En | Texto: Es En | PDF: Es | PDF: En

La aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar e identificar Trypanosoma rangeli y Trypanosoma rangeli presenta a menudo dificultades de interpretación. Así, algunas pruebas generan la amplificación de bandas similares provenientes de uno de los dos parásitos, fragmentos polimórficos de un mismo parásito, o la prevalencia en la detección de T. cruzi en infecciones mixtas. En este estudio se presentan y analizan los trabajos de investigación básica realizados con el objeto de diseñar y estandarizar pruebas de PCR específicas de cada parásito. Los iniciadores TcH2AF/R se diseñaron sobre la base de la región diferencial observada entre las unidades génicas que contienen los genes h2a en estos tripanosomas. Esta pareja de iniciadores amplifican un fragmento de 234 pb específico para T. cruzi (cepas I y II). Los iniciadores TrF/R2 anillan en las regiones intergénicas del fragmento génico de 801 pb codificante para seis transcritos que forman la agrupación ARNsno-Cl en T. rangeli. Estos iniciadores amplifican un fragmento de 620 pb exclusivo de las cepas KP1(-) y KP1(+) de este parásito. La aplicación de estas PCR en vectores infectados y en pacientes con enfermedad de Chagas muestra que ambas pruebas constituyen herramientas útiles para el diagnóstico y la identificación diferencial de estos tripanosomátidos.

The application of polymerase chain reaction (PCR) to detect Trypanosoma rangeli and Trypanosoma rangeli often presents interpretation challenges. For example, some tests yield the amplification of similar bands from either parasite, polymorphic fragments of the same parasite, or present deviation towards T. cruzi in mixed infections. In this study, the basic researching needed for designing and standardizating specific PCR tests for each parasite species PCR are shown and analyzed. The TcH2AF/R primers were designed on the basis of the differential gene region observed between the histone h2a genic units of these parasites. These primers amplify a specific 234 bp fragment in T. cruzi (T. cruzi I and II strains). The TrF/R2 primers anneal to the intergenic regions of an 801 bp gene fragment encoding for six transcripts that conform the snoRNA-Cl cluster in T. rangeli. These primers amplify a fragment of 620 bp exclusively in KP1(-) and KP1(+) strains of the parasite. The application of these PCR tests in infected vectors and in chagasic patients show that both tests constitute useful tools for the diagnosis and differential identification of these Trypanosomatids.

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